La doi ani după evenimentele din film anterior, Larry Daley (Ben Stiller) este acum CEO al Daley Devices, o companie de televiziune directă răspuns că vinde invenții inspirate de experiențele sale ca un agent de pază de noapte la Muzeul American de Istorie Naturală. În timp ce bogat și de succes, el nu a avut timp pentru a vedea prezintă prietenii lui muzeu în câteva luni. Într-o zi, atunci când Larry se întoarce la muzeu, el află că este închis pentru renovări și upgrade-uri. El cere fostului său șef Dr. McPhee (Ricky Gervais) cu privire la aceasta. McPhee îi spune că, deoarece nu mulți oameni au venit la muzeu într-o lungă perioadă de timp, el a fost rugat să înlocuiască 90% din exponate de muzeu, care sunt în mișcare pentru a Arhivelor federale de la Institutul Smithsonian din Washington, DC; și umple muzeu cu exponate noi holografice care răspund automat întrebări pe teme istorice. Mai târziu în acea noapte, Larry intră în muzeu pentru a vizita prietenii lui pentru ultima oară și i se spune că în timp ce Theodore Roosevelt (Robin Williams), Rexy scheletul Tyrannosaurus, Paști Insula Capul (Brad Garrett), și Faraon Akhmenrah (Rami Malek) va rămâne la muzeu, Jedediah (Owen Wilson), Octavius ​​(Steve Coogan), colegii lor minifigures, Attila Hunul (Patrick Gallagher), Sacagawea (Mizuo Peck), Dexterul capucin Monkey, și oamenii de Neanderthal nu vor mai veni la viață Deoarece comprimatul de Aur a Akhmenrah că animat exponatele în fiecare noapte va rămâne, de asemenea,.